Plateforme d’histologie et de microscopie électronique

Plateforme d’histologie et de microscopie électronique

Depuis 2008, la plateforme d’histologie et de microscopie électronique offre plusieurs services, allant de la préparation d’échantillons biologiques humains ou d’animaux à des analyses morphologiques histologiques, cellulaires et ultrastructurales.

La plateforme détient un savoir-faire et une expertise pour la réalisation de projets nécessitant des techniques d'histopathologie, de morphologie ultrastructurale, de localisation subcellulaire et d’isolation de tissus, d’organoïdes ou de cellules à partir de coupes histologiques. 

Les applications primaires de la plateforme sont la fixation de tissus et cellules, l'inclusion (paraffine, O.C.T., EPON) et la congélation rapide, la réalisation de coupes (microtome, cryostat, ultramicrotome et cryo-ultramicrotome) et les colorations de routine (H&E, trichrome de Masson, uranyl-acétate et le citrate de plomb, etc.). Ces colorations sont généralement les premières étapes du processus permettant l’examen microscopique des tissus et cellules. 

Le service d’histologie détient un NanoZoomer qui permet de transformer les lames de verre histologique en lames virtuelles de haute résolution. Ces lames digitales peuvent être subséquemment visualisées et analysées sur moniteur via le logiciel NPD view.

L'équipe de la plateforme offre aussi un service d'immunohistochimie, d’immunofluorescence et d’immunogold pour évaluer l'expression de constituants cellulaire et subcellulaire spécifiques. Les techniques peuvent aussi être associées à d’autres activités développées par la plateforme.

D'autres appareils spécialisés sont également disponibles par le biais du Centre de caractérisation des matériaux de l'Université de Sherbrooke comme la microscopie électronique à balayage.

Services offerts

Circulation des tissus

À la suite d’une fixation dans le paraformaldéhyde, les tissus sont déshydratés afin de permettre leur inclusion dans la paraffine. Les tissus circulés à la Plateforme doivent être fixés dans le paraformaldhyde. Les tissus ayant été fixés par une autre méthode (Bouin, formaline, formol) seront traités de façon individuelle.

Préparation des tissus pour des analyses ultrastructurales

Préparation standard, fixation, post-¬fixation, déshydratation, infiltration.

Inclusion des tissus dans la paraffine

À la suite de la circulation, les tissus sont inclus dans de la paraffine afin de permettre des coupes tissulaires très minces (4-5μm). Les tissus fixés suivant cette méthode ne peuvent pas être utilisés pour détecter les antigènes labiles ou isoler l'ADN/ARN (option: congélation des tissus frais).

Congélation des tissus frais

Les tissus frais sont inclus dans un composé « d’O.C.T. ». Cette technique solidifie les tissus permettant des coupes très minces. Les tissus non fixés et congelés conservent leur antigénicité mais démontrent une préservation morphologique inférieure. Ce type de congélation convient à la détection d’antigènes labiles et à l’isolement de l’ADN/ARN.

Préparation de tissus pour analyse d'immunolocalisation ultrastructurale

Fixation légère des tissus et congélation rapide ou inclusion dans des résines permettant de préserver l'immunoréactivité des tissus.

Inclusion d’un tissu dans l’EPON

Inclusion des échantillons biologiques dans l’EPON afin de réaliser des études morphologiques à l’échelle ultrastructurale.

Coupes histologiques au microtome

Coupes tissulaires très minces (4-5μm) séquentielles ou non-séquentielles permettant les études morphologiques, histologiques et immunohistochimiques.

Coupes au cryostat

Coupes tissulaires très minces (4-5μm) provenant de tissus frais congelés dans l’O.C.T. Permet d’obtenir un diagnostic rapide ou pallier les problèmes de fixation menaçant l’intégrité des constituants cellulaires. Cependant, la morphologie des tissus n’est pas maintenue de manière optimale. Les coupes séquentielles ne sont pas possible.

Coupes au ultramicrotome et cryo‐ultramicrotome:

La coupe à l’ultramicrotome des spécimens biologiques est une étape préalable essentielle afin de produire des sections semi et ultra-fines (40-200 nm d'épaisseur). De plus, une cryo-chambre permet de couper à basse température. Ces sections peuvent ensuite être observées en microscopie électronique.

Coloration de routine

Premières étapes du processus permettant l’examen microscopique des tissus pour identifier certains constituants cellulaires. Les colorations disponibles pour l’histologie sont l’hématoxyline et éosine, l’alcian bleu, l’acide périodique de Shiff, trichrome de Masson, Sirius Red et Oil red-O. Le développement de colorations particulières ou spécialisées est possible sur demande. Pour la microscopie électronique, les colorations disponibles sont l’uranyl-acétate et le citrate de plomb.

Scanner de lames virtuelles et pathologie numérique

Permet de scanner des lames avec système de gestion d'images. Le scanner de lames NanoZoomer permet de numériser, en lumière blanche ou fluorescente, une lame entière à la résolution souhaitée. Après la numérisation, une image virtuelle de la lame histologique entière peut être affichée et évaluée sur un moniteur via le logiciel NDP view et remplace ainsi l’évaluation via un microscope traditionnel, en conservant la faculté de faire un grossissement de plusieurs centaines de fois sur toute zone d’intérêt. Les lames virtuelles sont donc représentatives du contenu biologique des lames physiques.

Immuno‐cytolocalisation

Permet de déterminer la localisation cellulaire ou intracellulaire de protéines reconnues de manière spécifique par leur anticorps. Les techniques utilisées au niveau histologique sont l’immunohistochimie et l’immunofluorescence alors que pour la microscopie électronique, la technique requiert des anticorps marqués à l’or (immunogold).

Équipe

Pre Nathalie Perreault
Responsable scientifique

Pre Nathalie Perreault

Charles Bertrand
Professionnel en caractérisation (plateforme de microscopie électronique)

Charles Bertrand 

Marilène Paquette
Directrices des opérations

Marilène Paquette

Marjolaine Goyette
Directrices des opérations

Marjolaine Goyette

Informations supplémentaires

Service offert : Point de dépôt à l’aile 4 (local 9416) et à l’IRCUS.